操作步骤
1. 开机:打开FlowSight主机和两个电脑的电源,电脑主机登录默认密码为"IS100";双击FlowSight-INSPIRE软件图标、启动程序。
2. 检查鞘液、清洗液等是否足够,将废液桶清空。
3. 单击软件界面右下方的"Start up",仪器会自动冲洗管路、将鞘液装载到液流系统中,此过程大概要花费10 min。
4. 点击"Load",在1.5 ml或者0.5 ml离心管中加入两滴FlowSight Calibration Beads、混匀,放到上样孔中,仪器会自动吸取Beads。
5. 系统自检:等待Beads运行稳定后,在"ASSIST"界面中点击"Start all calibrations and tests",仪器自动对系统状态进行检测,此过程大概花费15 min。
6. 在"File"中选择"Load default template"或者已有模板。
7. 点击"Load",在1.5 ml或者0.5 ml离心管中加入样品(每种染料都标记)。
8. 在"Illumination"界面中,打开本次实验要用的所有激光器。
9. 调整激光机的功率使得荧光值最大,但又不处于过饱和状态:激光器调节原则为使相应荧光通道的Raw Max Pixel为100-4000之间。
10. 在"Plot"界面中,生成点图(dot plot)或者直方图(histogram)用于选择数据获取所需的细胞群体。
11. 在"acquisition parameters"中选择数据保存的文件名称、文件夹、想要获取的细胞群及细胞数(也可以选择保存所有细胞的数据)。
12. 在"File"中选择文件的保存格式:.rif(IDEAS),.fcs(FACS software)。
13. 点击"Acquire"获取数据;按照这样设置和方法,依次获取、保存所有样品的数据。
14. 荧光补偿:两种方式——在线和离线荧光补偿,所需样本——单阳性。
生物学实验中心
天津市动植物抗性重点实验室
2022.3
注意事项
所有流动相试剂(PBS、次氯酸钠等)必须经过0.45μm过滤。
上样所需的细胞需要经过70μm过滤网(200目)过滤(不能用纱布过滤)。
所有学生必须经仪器管理者操作仪器,不能单独操作仪器。
每周必须开机运行一次,开机前需检查鞘液、清洗液等是否足够,将废液桶清空。开机后单击软件界面右下方的"Start up",仪器会自动冲洗管路、将鞘液装载到液流系统中,已完成仪器的清洗过程。
关机需要40分钟左右,这段期间仪器将进行自清洁,清洁完毕后仪器将自动关机,不能手动关机。关机完成后再进行断电。
所有数据必须经管理者授权使用实验中心无病毒的U盘,或光盘才能进行拷贝。
生物学实验中心
天津市动植物抗性重点实验室